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非洲豬瘟病毒熒光定量PCR檢測試劑盒1

簡要描述:本試劑盒主要用于動(dòng)物組織及血液中非洲豬瘟病毒DNA的擴(kuò)增。將組織液(包括組織研磨液、細(xì)胞懸液、血液、血清、精液、唾液、尿液等)、組織塊以及環(huán)境和拭子等樣本進(jìn)行處理后,可直接用于擴(kuò)增。本試劑盒中使用的Rapid DNA-Lysis采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需反復(fù)離心,從而獲得高質(zhì)量的DNA。試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng),可消除擴(kuò)增污染對qPCR的影響。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2023-04-27
  • 訪  問  量:1126
詳情介紹

非洲豬瘟病毒熒光定量PCR檢測試劑盒(免提法)

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒主要用于動(dòng)物組織及血液中非洲豬瘟病毒DNA的擴(kuò)增。將組織液(包括組織研磨液、細(xì)胞懸液、血液、血清、精液、唾液、尿液等)、組織塊以及環(huán)境和拭子等樣本進(jìn)行處理后,可直接用于擴(kuò)增。本試劑盒中使用的Rapid DNA-Lysis采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需反復(fù)離心,從而獲得高質(zhì)量的DNA試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng),可消除擴(kuò)增污染對qPCR的影響。

本試劑盒僅供研究使用,不可用于食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

組分

50次)

Rapid DNA-Lysis

1 mL

熒光PCR反應(yīng)液

1 mL

樣品稀釋液

1.5mL×4

陽性對照

50 μL

陰性對照

50 μL

說明書

1

 保存條件

-20oC保存。

使用前將Rapid DNA-Lysis室溫充分混勻熒光PCR反應(yīng)液、陽性對照溶解后需置于冰上。

需要準(zhǔn)備

熒光定量PCR儀、恒溫金屬浴、離心機(jī)、移液器

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

1)組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液、血清、血液、唾液、尿液、精液等。取10 μL組織液置于離心管中。

2)加入20 μLRapid DNA-Lysis

3)混勻。

4)置于55℃作用5分鐘加入100μL樣品稀釋液,混勻后,取上清。

2. 組織塊的處理

1)用眼科剪取半顆米粒大小的組織塊(< 3 mm3),并將組織塊剪成肉泥狀。

2加入20 μL Rapid DNA-Lysis

3)混勻。

4置于55℃作用5分鐘加入100μL樣品稀釋液,混勻。

58000轉(zhuǎn)離心30取上清

3. 環(huán)境樣本和拭子的處理

1)用棉簽反復(fù)涂抹桌面、鞋底、頭發(fā)、車輪等表面,并將棉棒浸泡在500ul(生理鹽水PBS或水)中,作用5分鐘,將棉簽中液體擠壓至EP管中。

2)吸取10 μL(1)中液體,加入20 μLRapid  DNA-Lysis

3混勻。

4置于55℃作用5分鐘加入100μL樣品稀釋液,混勻取上清。

4.  提取對照的處理

1)在上述1,2,3樣品處理的同時(shí),取10 μL(生理鹽水、PBS或水)加入20 μL Rapid DNA-Lysis

2混勻。

3置于55℃作用5分鐘加入100μL樣品稀釋液,混勻取上清。

二、在DNase free 的離心管中配制熒光定量PCR反應(yīng)體系


陰性對照(20 μL

待檢樣品(20 μL

陽性對照(20 μL

提取對照(20μL

熒光 PCR反應(yīng)液

18 μL

18 μL

18 μL

18 μL

待檢樣品

-

2 μL

-

-

陽性對照

-

-

2 μL

-

陰性對照

2 μL

-

-

-

提取對照

-

-

-

2 μL

三、按照以下方法設(shè)定熒光定量PCR反應(yīng)

步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

污染消化

37oC

2min

1

預(yù)變性

95 oC

2min

1

變性

95 oC

10 s

40

退火延伸

60 oC

30s

設(shè)置熒光基團(tuán)為Fam,淬滅基團(tuán)為BHQ,參比基團(tuán)為None。退火延伸步驟中采集熒光數(shù)據(jù)。

四、結(jié)果判定

陽性對照:Ct<35且有明顯擴(kuò)增曲線,呈典型的S型曲線。

陰性對照:無Ct值,無明顯擴(kuò)增曲線,結(jié)果成立。

待檢樣品:Ct>40或無,則為陰性

35<Ct<40,且有S形擴(kuò)增曲線,則為可疑。若無明顯擴(kuò)增曲線,則為陰性。可疑樣品需重新處理樣品后再次檢測,若Ct<40且出現(xiàn)S形曲線,則為陽性,反之為陰性。

Ct35,且有明顯的S形擴(kuò)增曲線則為陽性。若擴(kuò)增曲線呈不規(guī)則形狀需重新檢測。

 

注意事項(xiàng)

(1) 所有試劑應(yīng)按照規(guī)定溫度儲(chǔ)存。請勿反復(fù)凍融。

(2) 檢測過程應(yīng)按照分區(qū)(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū))進(jìn)行。各區(qū)物品專用,不得交叉使用,避免污染。

(3) 檢測前后均需要對操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材(包括吸頭、PCR管)均需要無酶處理或使用商品化的無酶耗材。

(4) 為了避免對檢測結(jié)果的影響,應(yīng)避免使用含有熒光物質(zhì)的手套,避免用手直接接觸各項(xiàng)試劑,預(yù)防交叉污染。

(5) 采集全血時(shí)應(yīng)當(dāng)使用jv櫞酸鈉抗凝,而不要使用肝素EDTA

(6) 樣品處理過程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染,推薦按照以下加樣順序加樣,依次為陰性對照、待檢測樣本、陽性對照。

(7) 使用陽性對照時(shí)應(yīng)特別注意防止污染。

(8) PCR反應(yīng)完成后,用完的PCR管直接丟棄,嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室開蓋,以防止氣溶膠污染。

(9) 為防止試劑盒污染,請勿將不同批號(hào)試劑盒混用。


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